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給種子做個“親子鑒定”

   2015-06-02 31690
核心提示: ●DUS田間表型鑒定是對申請保護的植物新品種進行特異性、一致性和穩(wěn)定性的栽培鑒定試驗或室內(nèi)分析測試的過程。測試方法是將申請品種與近似品種在相同的生長條件下,從植物的種子、幼苗、開花期、成熟期等各個階段對多個質(zhì)量性狀、數(shù)量性狀及抗病性等作出觀察記載,并與近似品種進行結(jié)果比較。
●DUS田間表型鑒定是對申請保護的植物新品種進行特異性、一致性和穩(wěn)定性的栽培鑒定試驗或室內(nèi)分析測試的過程。測試方法是將申請品種與近似品種在相同的生長條件下,從植物的種子、幼苗、開花期、成熟期等各個階段對多個質(zhì)量性狀、數(shù)量性狀及抗病性等作出觀察記載,并與近似品種進行結(jié)果比較。

●DNA室內(nèi)基因型鑒定是一項生物學檢測技術(shù),以玉米為例,玉米有總數(shù)約為30億個堿基對的DNA,每個品種的DNA都不完全相同,品種與品種之間不同的堿基對數(shù)目達幾百萬之多,因此通過分子生物學方法顯示的DNA圖譜也有差異,由此可以識別不同的品種。


如果將100個品種撕掉標簽和包裝,通過種子形態(tài)或者田間種植進行形態(tài)觀察讓它們一一對號入座,辨別出分別是什么品種,我想幾乎沒有人能夠做到,那成千上萬個品種就更不可能做到了。但利用DNA指紋技術(shù)識別這些品種就輕而易舉了,一天就可以完成。“這就是DNA鑒定技術(shù)既準確可靠,又經(jīng)濟快捷的優(yōu)勢?!北本┦修r(nóng)林科學院玉米研究中心主任趙久然的信心來自于他們團隊20余年持之以恒的關(guān)于玉米標準DNA技術(shù)的研究與應(yīng)用。

農(nóng)業(yè)部辦公廳日前發(fā)布了《農(nóng)作物品種DNA身份鑒定體系構(gòu)建實施方案》,明確了農(nóng)作物品種DNA身份鑒定體系構(gòu)建的重要意義和發(fā)展方向。

且說快和準

難以想象僅2014年一年時間里,玉米中心做過的DNA指紋檢測鑒定樣本量達1萬多份?!罢3绦蚴?個工作日之內(nèi)出結(jié)果,加急樣品48小時內(nèi)出結(jié)果?!睓z測中心王鳳格博士說,“無論是已審定的、參加過區(qū)試的,還是提交品種權(quán)保護的品種,凡是在玉米中心做過檢測的,其‘指紋’和痕跡就會永久留存了。目前,這個標準指數(shù)庫已經(jīng)保存了2萬多個玉米標準DNA指紋信息,未來還會進一步擴容。”

人類DNA鑒定技術(shù)的應(yīng)用也有近20年了,通過人的DNA檢測可以進行親子鑒定,更可以用于刑事偵查中的DNA比對,已經(jīng)成為公安機關(guān)有效的破案利器。作物與人都屬于生物,遺傳信息載體都是DNA,很多技術(shù)是相通的,但也有不同之處。趙久然解釋,在人類DNA檢測結(jié)果判別上,引入最大似然率概念,就是說兩個樣本的DNA鑒定結(jié)果完全一樣,也存在著極小概率不是同一個人的可能性。而在玉米品種判定中,沒有使用“最大似然率”這個概念,采用了“高度近似”這個概念。就是說如果兩個品種的DNA鑒定結(jié)果相同,其判定結(jié)論是“相同或高度近似”,有可能不同,但即使有些許差異,這種差異也是很小的,頂多屬于派生品種范疇。如果把兩個品種種在一起,連育種者自己都分不清哪個是他育成的品種,還能說那是一個新品種嗎?“同”是相對的,“不同”是絕對的,沒有兩個絕對相同完全一樣的事物,關(guān)鍵是確定和把握好尺度。

遏制“仿冒套”

有人說“市場上至少1/3的種子是假冒的。”有人感慨“新品種培育六七年,仿冒才幾天?!睒I(yè)內(nèi)認為“仿冒套”傷的是種業(yè)創(chuàng)新力,呼吁通過DNA身份鑒定這項技術(shù)支撐,能夠?qū)Α胺旅疤住逼鸬蕉糁谱饔?,鼓勵真正的品種創(chuàng)新,引導(dǎo)市場走向自律。

人靠相貌等可以辨別,而DNA鑒定是最終途徑。農(nóng)作物也是一樣,由于少數(shù)具備高產(chǎn)、廣適、抗病等特性的親本被集中應(yīng)用,在原品種基礎(chǔ)上稍作修改的派生品種越來越多,品種間的遺傳差異是肉眼所難以辨別的,這時就需要DNA來鑒定其身份了。

例如山東濟南中院受理先鋒公司告某公司生產(chǎn)的“費玉3號”侵犯“先玉335”品種權(quán)案,經(jīng)玉米中心DNA檢測,“費玉3號”與農(nóng)業(yè)部“先玉335”標準樣品比較,在40個位點上位點差異為1,被告未提出有利證據(jù)證明不是同一品種,判決被告停止侵權(quán)并賠償原告經(jīng)濟損失。

“依據(jù)玉米DNA指紋檢測標準,如果差異位點數(shù)≥2,證明為不同品種;差異位點數(shù)≤1,則證明品種相同或高度近似。”趙久然說,“這其中是留有框量的,但是基本不給‘仿冒套’鉆空子的余地?!?/span>

不是隨便“抓一把”

玉米有30億個堿基對,憑什么僅靠目前的40個位點檢測結(jié)果,就能判斷清楚?

對此,趙久然說,這40個位點不是隨便“抓一把”。2001年起確立了核心引物組合法的品種鑒定方案,從2001年~2005年,經(jīng)過4年多系統(tǒng)篩選和重新設(shè)計,形成了一套共40個位點適于玉米品種鑒定的SSR(簡單重復(fù)序列)引物組合,這些位點都存在等位基因,在不同品種間存在著明確的差異,這些差異組合就可以組合出巨大的天文數(shù)字。在此基礎(chǔ)上研制出國內(nèi)首個和唯一的適合玉米品種真實性檢測的的DNA指紋復(fù)合擴增試劑盒專利產(chǎn)品。利用這套引物,僅玉米中心就開展了近5萬份樣品的真實性檢測,充分檢驗了40個引物的有效性。

SNP(單核苷酸多態(tài)性)技術(shù)是否就此取代了SSR技術(shù)在DNA身份鑒定測試中的應(yīng)用?

“實際上是推廣一代,研究一代?!壁w久然說,每種標記技術(shù)都在特定時期內(nèi)對品種檢測工作發(fā)揮一定作用,其中SSR和SNP由于均為共顯性遺傳、染色體定位清楚、具有高通量自動化的潛力而被UPOV的BMT分子測試指南推薦作為品種鑒定和數(shù)據(jù)庫構(gòu)建的優(yōu)選標記。趙久然認為,兩種標記技術(shù)均是比較適合品種指紋分析的標記,其中SSR標記可以滿足大部分樣品快速低成本的進行真實性檢測的要求,而SNP標記可以對其中鑒別困難的派生品種進行精細鑒別,兩種標記技術(shù)各自具備優(yōu)缺點,可優(yōu)勢互補,未來將長期并存應(yīng)用。
 
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